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更新時(shí)間:2011-08-18
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一、石蠟切片的過(guò)程:
1、取材:刀片要求鋒利而薄,組織厚度約2—3mm,大小1.5×1.5×0.2~0.3cm為宜.取材時(shí)間越快越好.
2、固定:組織取下后應(yīng)立即放入10%福爾馬林(相當(dāng)于4%甲醛)固定.
注意:①固定液量應(yīng)為組織塊體積的40倍.
②固定時(shí)間固定時(shí)間與使用的固定液種類(lèi)和組織塊大小,溫度等有關(guān).一般為3—24h.
③固定溫度大多可在室溫固定,在低溫(4℃)時(shí)間應(yīng)延長(zhǎng).
④固定容器應(yīng)大些.
3、漂洗:流水沖洗2—10h.
4、脫水:從低濃度酒精到高濃度酒精.
70%(數(shù)分鐘)→80%(60-120’)→90%(60-120’)→95%(60-120’)→95%(60-120’)→100%(60-120’)→100%(60-120’).
5、透明:組織塊脫水后必須經(jīng)過(guò)一種既能與酒精混合又能溶解石蠟的溶劑,而使石蠟進(jìn)入組織塊.常用二甲苯,一般浸泡30m即可.
6、浸蠟:組織經(jīng)透明后在熔化的石蠟內(nèi)浸漬的過(guò)程稱(chēng)浸蠟.一般需經(jīng)2—3次浸漬才能完成,總時(shí)間為3—4h.用于浸蠟的石蠟熔點(diǎn)為52—56℃.
7、包埋:先將熔化的石蠟倒入包埋框再用加熱的鑷子將組織塊放入.包埋面必須平整.包埋后石蠟稍凝后可移入冷水或冰箱中加速凝固.
8、切片:修塊→切片→展片→撈片→烤片.也可作冰凍切片.
二、熒光染料的配制:
儲(chǔ)藏液:1mg/mldapi(DMSO、去離子水、pbs都可以溶解)
工作液:通常1μg/ml
染色時(shí)須避光,10min左右
用pbs沖去多余染液即可觀察。
相關(guān)產(chǎn)品信息:精子分析系統(tǒng),尼康80i,CX21便宜價(jià)格,熒光顯微鏡